Elisa-assay begrijpen: principe, stappen en toepassingen

Elisa (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) is een veelgebruikte techniek in de moleculaire biologie voor het detecteren en kwantificeren van eiwitten of peptiden in een monster. Het omvat het binden van het doeleiwit of -peptide aan een antilichaam, dat vervolgens wordt gedetecteerd met behulp van een op enzym gebaseerd substraat. De test is gebaseerd op het principe van competitieve binding, waarbij het doeleiwit of -peptide concurreert met een bekende standaard voor binding aan het antilichaam. De basisstappen van een Elisa-test zijn als volgt: 1. Bereiding van monsters: De monsters worden bereid door de interessante eiwitten of peptiden uit de weefsels of cellen te extraheren. Bereiding van standaarden: Bekende hoeveelheden van het doeleiwit of -peptide worden als standaard bereid.
3. Coating van platen: Microtiterplaten zijn gecoat met een specifiek antilichaam dat zich bindt aan het doeleiwit of peptide.
4. Incubatie en wassen: De monsters en standaarden worden aan de platen toegevoegd en gedurende een bepaalde periode geïncubeerd. De platen worden vervolgens gewassen om al het ongebonden materiaal te verwijderen. Detectie: Een substraat, zoals een enzym-geconjugeerd antilichaam, wordt aan de platen toegevoegd en gedurende een verdere tijdsperiode geïncubeerd. Het substraat bindt zich aan het gebonden doeleiwit of -peptide, wat leidt tot een kleurverandering.
6. Meting: De intensiteit van de kleur wordt gemeten met behulp van een spectrofotometer of een ander geschikt apparaat.
7. Berekening: De hoeveelheid doeleiwit of peptide in elk monster wordt berekend op basis van de intensiteit van de kleur en de bekende concentratie van de standaarden. Elisa-tests worden veel gebruikt op veel gebieden, waaronder immunologie, kankeronderzoek, diagnose van infectieziekten en geneesmiddelen ontwikkeling. Ze bieden verschillende voordelen ten opzichte van andere technieken, zoals Western-blotting en radio-immunoassays, waaronder een hogere gevoeligheid, specificiteit en eenvoud.