Înțelegerea testului Elisa: principiu, pași și aplicații

Elisa (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) este o tehnică utilizată pe scară largă în biologia moleculară pentru detectarea și cuantificarea proteinelor sau peptidelor dintr-o probă. Aceasta implică legarea proteinei sau peptidei țintă la un anticorp, care este apoi detectat folosind un substrat pe bază de enzime. Testul se bazează pe principiul legării competitive, în care proteina sau peptida țintă concurează cu un standard cunoscut pentru legarea la anticorp.

Pașii de bază ai unui test Elisa sunt următorii:

1. Pregătirea probelor: Probele sunt pregătite prin extragerea proteinelor sau peptidelor de interes din țesuturi sau celule.
2. Prepararea standardelor: cantități cunoscute de proteină sau peptidă țintă sunt preparate ca standarde.
3. Acoperirea plăcilor: plăcile de microtitrare sunt acoperite cu un anticorp specific care se leagă de proteina sau peptida țintă.
4. Incubare și spălare: Probele și standardele sunt adăugate pe plăci și incubate pentru o perioadă de timp. Plăcile sunt apoi spălate pentru a îndepărta orice material nelegat.
5. Detectare: Un substrat, cum ar fi un anticorp conjugat cu enzime, este adăugat pe plăci și incubat pentru o perioadă suplimentară de timp. Substratul se leagă de proteina sau peptida țintă legată, ceea ce duce la o schimbare de culoare.
6. Măsurare: intensitatea culorii este măsurată folosind un spectrofotometru sau alt dispozitiv adecvat.
7. Calcul: Cantitatea de proteină sau peptidă țintă din fiecare probă este calculată pe baza intensității culorii și a concentrației cunoscute a standardelor. Testele

Elisa sunt utilizate pe scară largă în multe domenii, inclusiv în imunologie, cercetarea cancerului, diagnosticul bolilor infecțioase și medicamente. dezvoltare. Acestea oferă mai multe avantaje față de alte tehnici, cum ar fi Western blotting și radioimunotestele, inclusiv sensibilitate, specificitate și simplitate mai ridicate.